JURNAL 8 : Kromatografi lapis tipis dan kolom

JURNAL VII

PRAKTIKUM KIMIA ORGANIK I

KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DAN KOLOM

DISUSUN OLEH :

SUCI DESMARANI

(NIM : A1C117081)

DOSEN PENGAMPU :

Dr. Drs. SYAMSURIZAL., M.Si

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN KIMIA

JURUSAN PENDIDIKAN MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

FAKULTAS KEGURUAN DAN ILMU PENDIDIKAN

UNIVERSITAS JAMBI

2019

PERCOBAAN VII

I. Judul                       :  Kromatografi lapis tipis dan kolom

II. Hari/ Tanggal       :  Sabtu / 20 April 2019

III. Tujuan                 :

Pada akhir percobaan ini harus mahsiswa dapat memahami mengenai :

• Teknik-teknik dasar kromatografi lapis tipis dan kolom
• Membuat pelat kromatografi lapis tipis dan kolom kromatografi
• Memisahkan suatu senyawa dari campuran dengan kromatografi lapis tipis dan murnikannya dengan kolom
• Memisahkan pigmen tumbuhan dengan cara kromatografi kolom

IV. Landasan teori

Teknik kromatografi merupakan campuran senyawa dapat dipisahkan menjadi komponen-komponen berdasarkan pendistribusian zat antara dua fase yaitu fase diam stasioner dan fase gerak mobile. azas penting kromatografi adalah senyawa yang berbeda mempunyai koefisien distribusi yang berbeda di antara fase diam dan fase gerak. senyawa yang berinteraksi lemah dengan fase diam akan lebih lama tinggal dalam fase gerak dan bergerak cepat dalam sistem kromatografi. sebaliknya, senyawa yang berinteraksi kuat dengan fase diam akan bergerak lambat. jadi setiap komponen dalam suatu campuran senyawa bergerak dengan laju yang berbeda dalam sistem kromatografi, sehingga menghasilkan pemisahan yang sempurna.

Kromatografi lapis tipis pada bahan penjerap diletakkan tersebar pada plat Kaca Aluminium ataupun plastik. Kelebihan kromatografi lapis tipis kelebihan dari metode lapis tipis Yaitu pengerjaannya yang lebih cepat kebutuhan bahan dapat disesuaikan dengan keperluan. Identifikasi senyawa dilakukan dengan menghitung dan membandingkan harga Rf (Retardation faktor) Semua zat yang terpisah dengan Rf zat autentik. Agar lebih teliti Adakalanya campuran sengaja diberi zat autentik dan dikembangkan sekaligus. Rf = jarak yang ditempuh senyawa / jarak garis depan pelarut. Kromatografi kolom merupakan salah satu teknik untuk pemisahan skala preparatif, dari beberapa miligram sampai puluhan gram (Tim Kimia Organik I, 2016).

Kromatografi  merupakan salah satu teknik analisis di dalam kimia organik khususnya yang biasa digunakan untuk memisahkan campuran zat menjadi komponen-komponen penyusunnya, sehingga masing-masing komponen tersebut dapat dianalisis secara menyeluruh. Berbagai  jenis kromatografi yaiyu kromatografi lapis tipis , kromatografi cair, khromatografi gas, kromatografi penukar ion, kromatografi afinitas.

Berikut beberapa istilah penting yang terkait dengan  kromatografi:

Istilah Penting	Pengertian
Fasa Gerakor pengemban	Pelarut yang mengalir didalam kolom atau lapisan tipis khroamtogram
Fasa diamor adsorben	Zat padat yang mengisi kolom atau melekat atau menempel pada lapisan plat atau kaca atau kertas baik berupa silika gel, selulosa, atau okta dodesil sulfat yang lazim tergantung jenis khromatografinya.
Eluen	Campuran pelarut yang dialirkan kedalam kolom atau merambat pada lapis tipis atau kertas
Eluat	Cairan yang keluar dari kolom yang membawa komponen tertentu dari campuran zat yang akan dipisahkan.
Elusi	Proses memisahkan komponen tertentu dari suatu campuran melalui kolom khromatografi dengan menggunakan kombinasi pelarut tertetnu.
Analit	Komponen-komponen Campuran yang  telah memisah melalui proses khromatografi.

Prinsip pemisahan didalam khromatograsi adalah suatu komponen penyusun zat yang terletak pada  perbedaan afinitas dimana gaya adesi dari tiap jenis analit terhadap fasa diam dan fasa gerak oleh karena itu masing-masing komponen penyusun suatu zat menjadi terpisah satu sama lain. Afinitas dari suatu analit ditentukan oleh daya adsorpsinya terhadap fasa diam ‘ dan Kelarutan analit tersebut terhadap fasa gerak yang digunakan. Semakin kuat adsorpsi  dari suatu analit terhadap fasa diamnya dan kelarutannya yang kecil terhadap fasa gerak sehingga waktu tinggalnya dalam kolom lebih lama dibandingkan dengan analit dimana daya adsopsinya lemah pada fasa diam serta  kelarutannya tinggi dengan fasa gerak yang akan digunakan.

http://syamsurizal.staff.unja.ac.id/2019/04/10/325teknik-pemisahan-dengan-khromatografi/

Dalam proses kromatografi terdapat kecenderungan sebagai berikut;

• Kecenderungan  molekul komponen untuk melarut dalam cairan;
• Kecenderungan molekul komponen untuk melekat pada permukaan padatan halus (adsorpsi/penyerapan);
• Kecenderungan molekul komponen untuk bereaksi secara kimia (terjadinya pertukaran ion).

Deteksi noda KLT (kromatografi lapis tipis) lebih mudah dibandingkan dengan kromatografi kertas dikarena dapat digunakan teknik-teknik umum yang lebih banyak. seringkali, noda tidak berwarna atau tidak berpendar jika dikenai sinar ultra violet dapat ditampakkan dengan cara mendekatkan papan pengembang pada uap iod. Uap iod akan berinteraksi/bereaksi dengan komponen-komponen sampel baik secara kimia atau berdasarkan kelarutan membentuk warna tertentu (Soebagio, 2000)

Teknik KLT yaitu adsorbent pada lapiskan lempeng kaca yang bertindak sebagai penunjang fase diam. Fase bergerak akan merayap sepanjang fase diam dan terbentuklah kromatogram. Ini dikenal juga sebagai kromatografi kolom terbuka. Metode ini sangat sederhana, cepat dalam pemisahan dan sensitive dan mudah untuk memperoleh kembali senyawa-senyawa yang terpisahkan. Yang sering digunakan sebagai materi pelapisnya adalah silica gel, tetapi terkadang juga digunakan bubuk selulosa dan tanah diatome, kieselguh. Sedangkan untuk fase diam hidrofilik digunakan pengikat seperti semen Paris, kanji, dispersi koloid plastik, silica terhidarsi. Dalam meratakan pengikat dan zat pada pengadsorpsi digunakan suatu aplikator (Khopkar, 2010).

Disaat identifikasi suatu kandungan dalam tumbuhan, setelah di lakukan isolasi dan dimurnikan, yang harus ditentukan terlebih dahulu adalah golonannya, barulah ditentukan jenis senyawa dalam golongan tersebut. Hal yang dilakukan terlebih hahulu adalah keserbasamaan senyawa tersebut harus diperiksa dengan cermat, artinya senyawa harus membentuk bercak tunggal dalam beberapa system KLT (kromatografi lapis tipis). Golongan senyawa dapat ditentukan dengan cara uji warna, penentuan kelarutan, bilangan Rf, dan ciri spektrum UV. Untuk identifikasi lengkap dalam golongan senyawa bergantung pada pengukuran sifat atau ciri lain dan kemudian dibandingkan dengan data dalam pustaka (Harborne, 1987:20).

V. Alat dan Bahan

5.1 Alat

Adapun alat yang digunakan pada percobaan ini yaitu:

• Pelat Kaca Kecil
• Oven
• Gelas Piala
• Batang Pengaduk
• Cawan Petri
• Tabung Reaksi
• Pipa Gelas Kapiler 
• Bejana Pengembang
• Lumpang
• Rotary Evaporator
• Pipet Tetes
• Glass Wool    

  

   5.2 BAHAN

   Adapun bahan yang diperlukan pada percobaan ini yaitu: 

• Metanol
• Silika Gel
• Aquades
• Asam Asetat
• Eter
• Benzena
• Kafein
• Kristal Iod
• Petrolium Eter
• Kristal Na-sulfat Anhidrat
• Selulosa
• Kalsium Karbonat
• Sukrosa
• Aseton
• Kertas Saring  

VI. Prosedur Kerja

 

 

A. Kromatografi Lapis Tipis

• Disiapkan Plat TLC
• Dibuat larutan pengembang dalam gelas piala 1L  dengan komposisi Etanol : Metanol : Kloroform     : Etil- Asetat : n-heksan : Aseton ( 40 : 68 : 108 : 115 : 140 : 152 ) ml
• Dibuat 10 larutan sampel daari 10 ekstrak tanaman dengan 5 ml metanol
• Masing- masing diambil larutan sampel yang sudah di ekstrak dibubuhkan ( ditotolkan ) diatas pelat TLC dengan jarak kira-kira 1cm dari tepi pelat kaca.
• Dikeringkan noda sampel dan standard dengan dryer (ditiup)
• Masukkan pelat ke dalam bejana pengembang
• Dibiarkan proses ini berlangsung sampai garis dmencapai 1 cm dari tepi atas pelat
• Diangkat pelat dari bejana, dilihat noda dengan lampu UV atau dibuat larutan dengann serium sulfat
• Dihitung dan dibandingkan semua Rf yang diperoleh.

B. Kromatografi Kolom

• Disiapkan 10 ekstrak daun
• Disiapkan kolom kromatografi
• Disumbat bagian bawah kolom dengan glass wool
• Dimasukkan silika gel kedalam larutan pengembang yang telah dibuat di awal
• Larutan tersebur kemudian dimasukkan kedalam kromatografi kolom
• Dimasukkan sampel yang akan di kromatografi
• Pelarut harus terus- menerus diteteskan kedalam kolom
• Tetesan yang keluar dari kolom ditampung dengan beberapa tabung reaksi bersih dan dipisahkan berdasarkan warnanya.

VII. Video Percobaan

Berikut salah satu video percobaan yang pernah dilakukan dan dapat dilihat pada link berikut: 
https://www.youtube.com/watch?reload=9&v=OZKuZ_w2Fg0&feature=youtu.be

Pertanyaan PraPraktek

• Pada prosedur kromatografi lapis tipis, menggunakan suspensi silika gel, Apa fungsi silica gel?
• Pada prosedur kromatografi kolom, Apa fungsi penambahan Na-sulfat anhidrat ?
• Kenapa pada percobaan kromatografi kolom pelarut harus diberikan secara terus menerus?